Загальна інформація

Обробка клінічного матеріалу і отримання дезоксирибонуклеїнової кислоти - найважливіший етап молекулярно-біологічного дослідження.

Використовуваний елемент для дослідження на визначення збудників ІПСШ представляє складну багатокомпонентну систему, яка вміщує багато інгібіторів, які гальмують амплификацию.

Найчастіше сам механізм включає наступні стадії:

• швидке розчинення клітин;
• усунення клітинних органел;
• ферментативна деструкція;
• екстрагування білків;
• осадження молекул в етиловому спирті.

Процес проведення процедури

підготовка

Для виділення геномної ДНК беруть 300 мМ ацетат натрію, 50 мМ ЕДТА, pH 7,5. Перед самим використанням вливають буферний розчин. Потім його кип'ятять в дистильованої воді, близько десяти хвилин, потім охолоджують п'ять хвилин в льоду. Потім готують саркозин. Для його приготування потрібно 10% даного розчину, а також стерильна вода, яку прогрівають при 65 ° С одну годину.

Для виділення плазмової ДНК з вечора засівають культуру бактерій в 5мл LB з антибіотиком і залишають на столі. З ранку її дорощують при 37оС і інтенсивно збовтують.

Для виділення ДНК з крові беруть свіжу кров, антикоагулянт, фільтровану папір (марлю) для подальшого просочування і освіти необхідного компонента.

Для виділення ДНК для ПЛР проводиться лізис мікроорганізму і екстракція нуклеїнової кислоти.

виділення ДНК

Для отримання геномної кислоти вносять метілкарбінол або пропанол в підготовлений зразок. В результаті утворюються фрагменти, придатні для виконання блот-гібридизації і клонування в бактеріофаги. Потім клітини промивають в 20мл холодного фосфатвмісних-сольового розчину. Далі їх ресуспендіруют.

Щоб виділити плазмову дезоксирибонуклеїнової кислоти, заздалегідь прогрітий матеріал беруть в облогу в Еппендорфі. Потім обробляють в азоті. Далі підливають гідроксид натрію і акуратно перемішують, інкубують 5 хвилин. Після збовтують і відстоюють. Потім обробляють фенол-хлороформом. Після цього сушать для випадання осаду при 65оС. Приготований компонент розчиняють в деионизованной рідини.

Щоб виділити зразок з крові, в пробірку присаживают 0,5 мл лізуючого речовини, а також 20 мкл рідкої крові, вносять 15 мкл протеїнази і змішують. Витримують при температурі 65 ° С протягом 1-3 годин. Після цього додають рівний об'єм фенолу і центрифугують три хвилини.

У разі виділення макромолекули для ПЛР відбувається просте кип'ятіння з подальшим заморожуванням і розморожуванням в присутності лізоциму. Для цього застосовуються спеціальні буфери, що містять детергенти і протеїназу.

реабілітаційний період

Після цієї процедури не передбачена реабілітація пацієнта.

показання

Основні показання: гепатит, менінгіт, сепсис, плеврит, артрит, паротит, венеричні хвороби, простатит, туберкульоз.

Протипоказання

Протипоказань не виявлено.

ускладнення

Як правило, ніяких наслідків після проведення маніпуляцій не спостерігається.